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Como o PCR em tempo real funciona com o vírus COVID-19?

Número Browse:1     Autor:editor do site     Publicar Time: 2020-08-20      Origem:alimentado

O RT – PCR é o método mais preciso disponível para a detecção do vírus COVID-19, pois a técnica de RT – PCR em tempo real é altamente sensível e específica e pode fornecer um diagnóstico confiável em apenas três horas. Em comparação com outros métodos de isolamento de vírus disponíveis, o RT-PCR em tempo real é significativamente mais rápido e tem menor potencial de contaminação ou erros, pois todo o processo pode ser realizado em um tubo fechado.


Etapas do trabalho de RT-PCR com o vírus COVID-19:


Depois de coletar a amostra do nariz ou garganta da pessoa, a amostra é tratada com várias soluções químicas que removem substâncias como proteínas e gorduras e que extraem apenas o RNA presente na amostra. Este RNA extraído é uma mistura do próprio material genético da pessoa e, se presente, o RNA do vírus.


O RNA é transcrito reversamente em DNA usando uma enzima específica. Os cientistas então adicionam fragmentos curtos adicionais de DNA que são complementares a partes específicas do DNA viral transcrito. Se o vírus estiver presente em uma amostra, esses fragmentos se ligam a seções-alvo do DNA viral. Alguns dos fragmentos genéticos adicionados são usados ​​para construir fitas de DNA durante a amplificação, enquanto os outros são usados ​​para construir o DNA e adicionar marcadores às fitas, que são então usadas para detectar o vírus.


A mistura é então colocada em uma máquina de RT – PCR. A máquina percorre as temperaturas que aquecem e resfriam a mistura para disparar reações químicas específicas que criam cópias novas e idênticas das seções-alvo do DNA viral. O ciclo é repetido indefinidamente para continuar a copiar as seções alvo do DNA viral. Cada ciclo dobra o número anterior: duas cópias se tornam quatro, quatro cópias se tornam oito e assim por diante. Uma configuração padrão de RT-PCR em tempo real geralmente passa por 35 ciclos, o que significa que, ao final do processo, cerca de 35 bilhões de novas cópias das seções de DNA viral são criadas a partir de cada fita do vírus presente na amostra .


À medida que novas cópias das seções de DNA viral são construídas, os marcadores marcadores se fixam nas fitas de DNA e, em seguida, liberam um corante fluorescente, que é medido pelo computador da máquina e apresentado em tempo real na tela. O computador rastreia a quantidade de fluorescência na amostra após cada ciclo. Quando um certo nível de fluorescência é ultrapassado, isso confirma que o vírus está presente. Os cientistas também monitoram quantos ciclos são necessários para atingir esse nível, a fim de estimar a gravidade da infecção: quanto menos ciclos, mais grave é a infecção viral.


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